闭经的内分泌检查除外器质性病变后，可按以下步骤作有关内分泌方面的检查。
1．孕激素试验 此系检测内源性雌激素水平，以评价体内雌激素水平及生殖道的完整性。单独用孕激素作试验，方法：黄体酮20mg，每日肌注一次，连续5天；或口服甲孕酮10mg，每日一次，连服5天，观察有无撤药性出血。用药后2～7天出现撤药性阴道出血者为阳性反应，表示生殖道发育正常，子宫内膜的功能存在，已受雌激素充分作用，因而对黄体酮能产生分泌期变化。同时说明"性腺轴"的功能基本上存在，但可能不够完善而不排卵。阴性反应不能除外子宫及生殖道异常，需作雌－孕激素试验，以进一步明确诊断。
有条件时可测定血生乳素，如正常，可初步除外垂体肿瘤。如高于正常，特别是有泌乳情况时，应行蝶鞍层摄片，排除肿瘤可能。必要及可能时，可作CT检查，以发现垂体微小肿瘤。
2．雌－孕激素试验 孕激素试验阴性者，可能系内源性雌激素水平不足，内膜受雌激素刺激生长不够所致。可每日口服已烯雌酚1mg，连服21天；也可用苯甲酸雌二醇，每3天肌注2mg，连用7次，最后5天肌注黄体酮每天20mg。停药后有出血者，说明体内雌激素水平不足，病变多在卵巢部位以上，需进一步寻找病因。停药后无出血者表明病变在子宫内膜。
3．垂体促性腺激素测定 雌激素撤药出血试验阳性者，示体内雌激素水平低下，应进一步区分系因卵巢本身受抑或因下丘脑－垂体功能障碍所致。可用放免法或生物法测定促性腺激素（FSH、LN）的水平。LH低下（＜5IU／L）或认为系促性腺激素合成分泌不足，病因可能在垂体或下丘脑。FSH上升（＞40IU／L）则多与卵巢功能衰退有关。FSH值在5～30IU／L之间者，提示卵巢有滤泡存在。
4．垂体兴奋试剂 如促性腺激素低于正常或在正常低限范围内，应辨别病变是在垂体还是在下丘脑。可用促性腺激素释放激素（GnRH）作垂体兴奋试验来加以区分。方法：试验前测LH，然后静滴LHRH100μg4小时，每15、30、60及120分钟各抽血测LH。下丘脑功能障碍者，在滴注30～45分钟LH上升，60～90分钟时下降，2～4小时内可有第二次上升，并能维持约4小时。垂体功能有缺陷时，LH虽有第一次上升，但不能维持很久，即使继续用药，也不出现第二次上升现象，说明垂体合成LH的功能受到限制。如因下丘脑受损而垂体有惰性时，开始滴药时可无反应，但在2小时左右可出现延迟反应。
